判断维度
先回答三个问题
把“能不能做”拆成可分别回答的判断。
- 靶点生物学相关性 — 它在你关心的生物学背景里是否真的参与
- 靶点可降解性 — 蛋白能否被泛素-蛋白酶体系统有效清除
- 靶点治疗潜力 — 降解它是否带来可观测的功能后果
首页 / 靶点可降解性评估
TARGET VALIDATION 靶点可降解性评估
TPD 项目的入口：用表达定位、蛋白周转、热稳定与功能依赖性等读出，判断一个靶点值不值得做、能不能被降解，给出可解释的结论与策略建议，而不是默认它可成药、可降解。
01
评估内容与对应技术
按评估维度分组，每一项都对应可执行的读出方法与它能回答的问题。
表达与定位
表达水平与亚细胞定位
先确认靶蛋白在体系里真实表达、定位在哪。
- qPCR — mRNA 表达水平定量
- Western Blot — 蛋白表达水平检测
- IF 免疫荧光 — 蛋白表达与亚细胞定位
- IHC — 组织层面表达分布（协作平台执行，我们负责方案与读出）
稳定性与周转
蛋白半衰期与周转
蛋白本底周转特征，直接关系到可降解性。
- Protein t1/2 assay — 靶蛋白基础半衰期测定
- CHX chase — 翻译阻断下的蛋白周转速率
热稳定与细胞内结合
热位移验证
确认配体对靶点的结合与稳定作用。
- TSA — 体外热稳定位移检测
- CETSA — 细胞内靶点结合与热稳定验证
功能依赖性
细胞是否真的依赖它
用遗传扰动验证靶点的功能必要性。
- CRISPR/Cas9 KO — 敲除后看表型是否依赖该靶点
- RNAi 敲低 — 降低表达看功能依赖
- 过表达 — 增益效应验证
- 突变引入 — 关键结构域 / 位点的功能依赖
功能读出
把依赖性落到可量化读出
将靶点扰动连接到具体的细胞表型。
- 细胞活力 / 增殖 — 功能后果量化
- 信号通路 / 报告基因 — 通路活性变化
02
你需要提供
材料越完整，评估越准；缺少的部分我们会先做一次可行性沟通再确定范围。
- 靶点信息 — 靶点名称、亚型、物种来源，以及你关心的生物学问题。
- 结构 / 序列 — 可用的蛋白结构、PDB 编号或序列信息（有则更准，没有也可推进）。
- 已有化合物 — 已知活性分子、工具化合物或拟用的 E3 配体（结构式 / SMILES）。
- 科学问题与目标 — 你想验证什么、计划走 PROTAC 还是分子胶、预期的下一步。
03
你会拿到
一份能支撑决策的评估结论，而不只是一堆原始数据。
- 可降解性判断 — 结合表达、周转与结合证据，给出靶点是否适合降解策略的判断。
- 功能依赖性证据 — 遗传扰动与功能读出的结果，说明细胞对该靶点的依赖程度。
- 策略建议 — 若适合降解，建议优先的 E3 体系与切入模块；若不适合，如实说明原因。
- 原始数据与报告 — 实验方法、对照设置与可追溯的原始数据，结论可复核。
相关模块
按 TPD 评价主线继续推进，或按需交叉组合。