细胞系构建
HiBiT 报告细胞系
把 HiBiT 标签内源敲入或稳定表达到目标蛋白上，得到可定量降解的活细胞模型。
- CRISPR/Cas9 内源 HiBiT knock-in 细胞系构建 — 在内源基因座融入 11 氨基酸 HiBiT 标签，按生理表达水平读出目标蛋白丰度
- POI-HiBiT 稳定细胞系构建 — 当内源敲入不可行时，用稳定过表达的 POI-HiBiT 融合体作为替代降解报告
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HiBiT DEGRADATION SCREENING HiBiT 高通量降解筛选
用 CRISPR 内源 HiBiT 敲入，在活细胞里定量、高通量评价 PROTAC 与分子胶诱导的降解，输出 DC50/Dmax 等标准参数并对化合物排序。
01
服务内容与对应技术
围绕 HiBiT 报告系统，从细胞系构建到降解读出与高通量筛选，按子领域分组，每项技术都标明它测什么。
降解检测与参数
降解读出与定量参数
用发光信号定量目标蛋白随化合物与时间的变化，给出标准化降解参数。
- Lytic HiBiT 降解检测 — 裂解后加入 LgBiT 与底物，终点法读出处理后剩余的目标蛋白量
- Live-cell HiBiT 实时动力学 — 不裂解、连续监测活细胞内目标蛋白丰度，给出降解的时间轨迹
- DC50 / Dmax / tmax / t1/2 / kdeg 测定 — 半数降解浓度、最大降解程度、达峰时间、降解半衰期与降解速率常数
- Dose-response 降解曲线 — 多浓度梯度处理拟合剂量-降解关系，给出 DC50 与 Dmax
- Time-course 降解动力学 — 固定浓度下多时间点取样，刻画降解起始、达峰与回升过程
- 降解速度/持续时间评价 — 比较化合物的起效快慢与降解维持时间，辅助先导化合物排序
- 高通量小分子库筛选 — 在板式发光读出下批量评价化合物库的降解活性并排序
- PROTAC 降解活性筛选 — 对 PROTAC 系列做剂量响应与活性分级，筛出强降解分子
- 分子胶降解活性筛选 — 评价分子胶诱导的目标蛋白降解，识别有效胶水分子（GSPT1/CRBN 方向为我们的特色）
02
你需要提供
信息越完整，方案设计越准、周期越短。以下为常见输入，可按项目情况增减。
- 目标蛋白与靶点信息 — 目标蛋白名称、基因座、可用细胞系背景，以及是否已有 HiBiT 敲入或 POI-HiBiT 报告细胞系。
- 化合物或化合物库 — 待测 PROTAC、分子胶或小分子库，含结构/编号、溶解信息、建议浓度范围与对照分子。
- 筛选目标与读出方式 — 希望终点法还是活细胞实时动力学、需要哪些参数（DC50/Dmax/t1/2 等）以及通量与排序需求。
- 已有数据与背景 — 已有降解或活性数据、阳性对照、已知毒性窗口等，便于设定剂量梯度与判读阈值。
03
你会拿到
我们负责方案设计、降解读出与数据整合，交付可直接用于决策的标准化结果。
- HiBiT 报告细胞系 — 经鉴定的内源 HiBiT knock-in 或 POI-HiBiT 稳定细胞系，附构建与验证记录，可用于后续筛选。
- 标准降解参数 — 每个化合物的 DC50、Dmax、tmax、t1/2、kdeg 等参数，含 dose-response、time-course 与恢复 / 反弹（recovery / rebound）动力学曲线。
- 化合物排序与筛选结果 — 按降解强度、起效速度与持续时间的分级与排序表，标注命中分子与建议跟进对象。
- 整合报告与原始数据 — 实验方案、原始发光读数、拟合曲线与结论的整合报告，便于复核与下游验证衔接。
04
常见问题
我们没有 HiBiT 敲入细胞系，可以做吗？
可以。我们提供 CRISPR/Cas9 内源 HiBiT knock-in 细胞系构建；若内源敲入不可行，可用 POI-HiBiT 稳定细胞系作为替代报告。建系完成后再进入降解检测与筛选。
HiBiT 筛选结果如何与 Western blot、机制验证衔接？
HiBiT 适合高通量定量与排序，命中分子建议用 WB 在蛋白水平复核降解，并可进一步做泛素化、三元复合物等机制确认（见“降解机制研究”模块）。我们可在方案中预留验证节点，把 HiBiT 读出与下游结果一并整合到报告里。
能筛哪些靶点？
靶点按项目做可行性确认，不预承诺现成靶点库；可行性取决于细胞系背景与 HiBiT 标签的可敲入性。分子胶与 GSPT1/CRBN 方向是我们的特色方向，欢迎就具体靶点沟通。